摘要：本文详细说明免疫血清制备中的动物选择、乳化方法、佐剂使用、剂量控制等注意事项，并介绍血清效价与纯度鉴定方法，为规范实验操作、获得高质量免疫血清提供思路方法。

一、关键注意事项

1. 动物选择

免疫用实验动物的抗体反应性个体差异性较大，因此免疫时至少应选用两只以上动物。另外，不能使用妊娠动物。

2. 抗原乳化

免疫用的抗原必须经FCA或FIA充分乳化后才能注射，否则将明显影响抗原的免疫效果。上述制备乳化抗原的方法较费时、费力。采用H-81微型振荡混合器法或三腔管研磨法制备。前者是将抗原液与佐剂按比例混合后，置于混合器上使之剧烈振荡（频率2900 转/分，振幅6 mm）；后者是将免疫用的佐剂和抗原液按比例混合后，吸入注射器内再将注射器连接于三腔管上反复抽吸研磨。这两种方法约1 小时即可使抗原充分乳化。

3. 佐剂的使用

佐剂一方面可提高特异性免疫反应的效果获得高效价的免疫血清，但若抗原不纯时，可使抗原中极微量的污染物（0.005 mgN）产生抗体，以致导致免疫血清的纯度受到影响。另外，有些实验动物种系对BCG过敏，尤其是豚鼠其次是家兔，当再次注射完全佐剂时，可以引起变态反应而导致免疫失败。为此，第二次免疫注射时应减少佐剂中BCG的含量或改用不完全佐剂，以减少和防止变态反应的发生。

4. 抗原剂量

 抗原的剂量决定于抗原的种类。对免疫原性强的抗原剂量应相别较少，免疫原性弱的抗原剂量可相对较多。抗原的用量一般以体重计算。在使用佐剂的情况下，一次注入的总剂量以0.5 mg/kg体重为宜。如不加佐剂时剂量可加大10 倍。另外，免疫周期长者可少量多次注射，免疫周期短者可较大量少次注射。

5. 多点注射

免疫方法上也可采用多点注射法免疫动物。即于家兔脊柱两旁选4-6 点皮下注射，同时于两侧肩部（或臂部）和鼠蹊部各注一处。每点注0.2 ml，间隔2 周后再于上述部位选不同点同上注射，也可产生高效价的免疫血清。

二、结果鉴定

以双相琼脂扩散试验测定所获免疫血清的抗体效价，并用琼指免疫电泳鉴定免疫血清中抗体的质量，应产生单一的沉淀弧线。鉴定方法的具体步骤参见有关部分。