豚鼠T淋巴细胞的测定

发布时间:2025-06-04 / 浏览数:15

原理

根据E—玫瑰花环形成率,可以间接判断机体细胞免疫力。目前,已广泛应用于临床,作为测定人群免疫状态的一个指标。


材料与仪器

试剂、试剂盒

兔红细胞悬液Hanks液肝素胎牛血清

仪器、耗材

离心机离心管摇床


步骤

1.  淋巴细胞提取


(1)取豚鼠抗凝血2毫升,加3毫升Hanks液使之稀释。加于3毫升淋巴细胞分层液液面之上(沿管壁轻轻加入,勿使两液相混)。


(2)2000转/分离心30分钟,吸淋巴细胞层到另一试管中加5倍体积的Hanks液洗1~2次,(1500转/分离心10分钟)弃上清即成。

图1  用分层液离心后的血细胞层


2.  加吸收过的胎牛血清0.1毫升,0.5%兔红细胞悬液0.2毫升,于淋巴细胞中。混合后,37℃水浴5分钟。


3.  500转/分离心5分钟,放4℃冰箱中2小时后,弃大部分上清。


4.  染色及观察

轻轻悬浮沉积的细胞。向悬液中滴一滴美兰液,混合,10分钟后取一滴放载玻片上,加盖玻片镜检。

高倍镜或油镜下计数200个淋巴细胞,凡结合3个或3个以上的兔红细胞者为阳性,计算花环形成细胞的百分率。



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