简介

细胞的复苏实验是指将冻存的细胞从 - 196 ℃ 的液氮中取出融解，使其活力恢复的过程。

原理

细胞的复苏实验的基本原理是通过快速融化的手段保证细胞外结晶在很短时间内融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞重新结晶对细胞造成损害。复苏成功的细胞可以保持很高的活力。

材料与仪器

步骤

细胞的复苏实验基本过程可分为以下几步：

A. 用止血钳从液氮罐中取出细胞冻存管 1 只，迅速将其置入 37 ℃ 水浴中，不断摇动使冻存的细胞悬液尽快融化。

B. 用酒精棉球擦拭冻存管，放入超净工作台中。

C. 将已融化的细胞悬液用吸管移入离心管中，加 10 倍体积的 DMEM 培养基，吹打混匀。

D.1500 r/min 离心 3 min，弃上清液。

E. 加入培养液吹打沉淀的细胞，使其悬浮，对细胞进行计数。

F. 按 5 x 105 个/ml 的细胞浓度，将细胞接种在培养瓶中，置于培养箱中培养。

G. 24 h 后取出培养瓶，观察细胞生长状况。

注意事项

1. 复苏时，从液氮取出冻存管到水浴中融化的过程要快，否则将会导致冰晶的形成，伤害细胞。同时，一次复苏的冻存管数量不要太多，否则会引起水浴锅中传热不佳，延缓存的细胞悬液融化的时间。

2. 为防止液氮冻伤，在复苏过程中应戴上棉质手套。

来源：丁香实验