细胞培养为何要先裂解红细胞?
发布时间:2025-07-27 / 浏览数:6
一、基本介绍
红细胞裂解液是一种简便易行的去除红细胞的方法,其原理是通过裂解液裂解红细胞,且该过程既不会损伤有核细胞,又能充分去除红细胞。这种裂解方式较为温和,主要应用于经酶消化分散的组织细胞分离纯化、淋巴细胞分离纯化,以及组织细胞蛋白与核酸提取等实验中红细胞的去除。经红细胞裂解液处理后得到的组织细胞不含红细胞,可进一步用于原代培养、细胞融合、流式细胞分析、核酸与蛋白的分离和提取等实验操作。
二、使用说明
① 组织细胞样品
1)新鲜组织经胰酶或胶原酶等消化分散成单个细胞悬液后,离心并弃去上清液。
2)从 4℃冰箱中取出 ELS 裂解液,按照 1:3-5 的比例向细胞沉淀中加入 ELS 裂解液(即 1ml 细胞压积加入 3-5ml 裂解液),轻轻吹打使其混匀。
3)以 800-1000rpm 的转速离心 5-8 分钟,之后离心弃去上层红色清液。
3)收集沉淀部分,加入 Hank’s 液或无血清培养液离心洗涤 2-3 次。
4)若裂解不完全,可重复步骤 2 和步骤 3。
5)重悬细胞,用于后续实验;若需提取 RNA,最好从步骤 4 开始在 DEPC 水配制的溶液中进行操作。
红细胞具有独特的特点和价值:它的生命周期很短,一般只有 120 天,但繁殖速度极快,能很好地体现细胞的分裂过程,是所有细胞中分裂最快的,因此在细胞培养中非常有用。此外,红细胞的构造十分简单,没有任何细胞器,仅由细胞膜和蛋白质构成。
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