豚鼠红细胞在不同渗透压的 NaCl 溶液中,细胞膜的完整性会发生变化:低渗溶液中水分渗入细胞,导致红细胞肿胀、破裂(溶血);通过配制梯度渗透压的 NaCl 溶液,检测不同浓度下的溶血率,绘制渗透脆性曲线,反映红细胞膜的稳定性。
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梯度 NaCl 溶液配制:在 12 支试管中,分别配制 0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.45%、0.5%、0.55%、0.6%、0.7%、0.8%、0.85%、1.0% 的 NaCl 溶液,每管 5mL。
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溶血反应:每管加入 0.1mL 2% 豚鼠红细胞悬液,轻轻混匀,37℃孵育 30 分钟。
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溶血率测定:3000rpm 离心 5 分钟,取上清液测 540nm 处 OD 值;以 0.1% NaCl 溶液(完全溶血)的 OD 值为 100% 溶血率,计算各浓度的溶血率。
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绘制曲线:以 NaCl 浓度为横坐标,溶血率为纵坐标,绘制渗透脆性曲线,确定 “溶血起点”(开始溶血的 NaCl 浓度)和 “溶血终点”(完全溶血的 NaCl 浓度)。