在这个充满未知与探索的科学世界里，每一项实验都像是打开了一扇通往新知识的大门。今天，就让我们一起走进免疫学的殿堂，揭秘一项既经典又重要的实验——溶血空斑实验。

什么是溶血空斑实验？

溶血空斑实验，又称体外抗体形成细胞测定技术，是Jerne于1963年设计的一种用于体外检测和计数抗体形成细胞（主要是B淋巴细胞）的方法。这项实验通过模拟体内抗体产生的过程，帮助我们更深入地了解免疫系统的运作机制。

溶血空斑实验原理

溶血空斑实验原理是将绵羊红细胞免疫的家兔或小鼠，取家兔淋巴结或小鼠脾细胞制成细胞悬液，与高浓度绵羊红细胞混合后加入琼脂糖凝胶中，其中每个释放溶血性抗体的B淋巴细胞在补体的参与下可溶解周围的绵羊红细胞，在周围形成一个可见的空斑，一个空斑代表一个抗体形成细胞，空斑的数量反映机体的体液免疫功能。

操作方法

常用的为SPA-SRBC溶血空斑试验。SPA能与人及多数哺乳动物IgG的Fc段呈非特异性结合，利用这一特征，首先将SPA包被SRBC，然后进行溶血空斑测定，可提高敏感度和应用范围。

在该测试系统中，加入抗人Ig抗体，可与受检细胞产生的免疫球蛋白结合形成复合物，复合物上的Fc段可与连接在SRBC上的SPA结合，同时激活补体，使SRBC溶解形成空斑。此法可用于检测人类外周血中的IgG产生细胞，与抗体的特异性无关。用抗IgA、IgG或IgM抗体包被SRBC，可测定相应免疫球蛋白的产生细胞，这种试验称为反相空斑形成试验。

其它测试

直接

经典的溶血斑试验用于检测实验动物抗体形成细胞的功能，其原理是将绵羊红细胞（SRBC）免疫小鼠，4天后取出脾细胞，加入SRBC及补体，混合在温热的琼脂溶液中，浇在平皿内或玻片上，使成一蒲层，置37℃温育。由于脾细胞内的抗体生成细胞可释放抗SRBC抗体，使其周围的SRBC致敏，在补体参与下导致SRBC溶血，形成一个肉眼可见的圆形透明溶血区而成为溶血空斑（plaque）。每一个空斑表示一个抗体形成细胞，空斑大小表示抗体生成细胞产生抗体的多少。这种直接法所测的细胞为IgM生成细胞，其他类型Ig由于溶血效应较低，不能直接检测，可用间接检测法。

间接

间接测试即在小鼠脾细胞和SRBC混合时，再加抗鼠Ig抗体（如兔抗鼠Ig），使抗体与细胞所产生的IgG或IgA与抗Ig抗体结合成复合物，此时能激活补体途径导致SRBC发生溶血，称间接空斑试验。

但是上述直接和间接空斑形成试验都只能检测抗红细胞抗体的产生细胞，而且需要事先免疫，难以检测人类的抗体产生情况。如果用一定方法将SRBC用其它抗原包被，则可检查与该抗原相应的抗体产生细胞，这种非红细胞抗体溶血空斑试验称为空斑形成试验，它的应用范围较大。

溶血空斑实验作为免疫学领域的一项经典实验，不仅帮助我们更深入地了解了免疫系统的运作机制，还在多个领域有着广泛的应用。让我们一起期待未来更多的科学发现和技术突破，共同探索免疫世界的无限奥秘！