摘要：免疫血清的制备是一项常用的免疫学实验技术。高效价、高特异性的免疫血清可作为免疫学诊断的试剂（如用于制备免疫标记抗体等），也可供特异性免疫治疗用。

实验方法原理

具有免疫原性的抗原可刺激机体相应B细胞增殖、分化形成浆细胞并分泌特异性抗体。由于抗原分子表面的不同决定簇为不同特异性的B细胞克隆所识别，因此由某一抗原刺激机体后产生的抗体，实际上为针对该抗原分子表面不同决定簇的抗体混合物（即多克隆抗体）。另外，抗体的产生具有回忆应答的规律性，现为初次免疫注射与再次免疫注射后的抗体应答特点截然不同。这是由于记忆性B细胞参与再次应答所致。

实验器材

实验材料：

家兔。

试剂、试剂盒：

灭菌生理盐水、IgG、酒精及碘酒、羊毛脂、石蜡油、BCGFIAFCA-IgG。

仪器、耗材：

剪刀镊子注射器针头称量瓶量筒动物固定架三角烧瓶手术器械血管夹黑丝线放血管

实验步骤

1、免疫方法

根据抗原的性质不同而异。下面以制备家兔抗人IgG免疫血清为例作具体说明。

1.  用剪刀剪去家兔两后脚掌的部分兔毛，以酒精及碘酒消毒皮肤。

2.  第一次免疫

用2 ml注射器吸取弗氏完全佐剂（FCA）乳化的抗原（人IgG）下称FCA IgG液1 ml，每侧脚掌皮下各注入0.5 ml。

3.  第二次免疫
间隔10-14 天后，于两侧窝及鼠蹊部肿大的淋巴结内注入FCA-IgG，每个淋巴结注0.1 ml，其余注入淋巴结附近皮下共1 ml。如淋巴结未肿大或肿大不明显时，直接注入两侧窝及鼠蹊部皮下。

4.  间隔7-10 天后，从耳静脉采血0.5～1.0 ml，分离血清，以双相琼脂扩散试验测定免疫血清的抗体效价（即试血）。效价至少应达到1∶16以上时才能放血。

5.  若效价未达到要求，可用不加佐剂的抗原液（人IgG）耳静脉内注射免疫。即于1 周内注射3 次，分别为0.1、0.3、0.5 ml。间隔1 周再试血。如效价达到要求应立即放血。另外，也可在第2 次免疫后，以弗氏不完全佐剂（FIA）乳化的抗原（人IgG）（简称FIA-IgG）再免疫1-2 次。注射部位、剂量和间隔均同第2 次，再试血测抗体效价，如效价达到要求立即放血。

2、放血

1. 心脏采用血法

（1）家兔仰面，四肢缚于动物固定架上（或由助手抓住四肢固定）。

（2）剪去左胸部兔毛，消毒皮肤。

（3）用左姆指摸到胸骨剑突处，食指及中指放在右胸处轻轻向左推心脏，并使心脏固定于左胸侧位置。然后，以左拇指触摸心脏搏动最强的部位。

（4）用50 ml注射器（连接16号针头），倾针45°角度，对准心搏最强处刺入心脏抽血致死。

（5）将抽取的血液立即注入无菌三角烧瓶中，待凝固后分离血清。

2.  颈动脉放血法

3、分离血清

将三角烧瓶的血置37 ℃温箱1 小时，再置4 ℃冰箱内3～4 小时。待血液凝固血块收缩后，用毛细滴管吸取血清。于3000 rpm离心15 分钟，取上清加入防腐剂（0.01 ％硫柳汞或0.02 ％叠氮钠，最终浓度），分装后置4 ℃冰箱中保存备用。