在细胞培养过程中，细菌、真菌和支原体污染较为常见，且一旦发生污染，多数细胞难以挽救，往往只能丢弃。以下这些容易被忽视的情况，都可能造成细胞污染，需格外留意：

一、操作不规范埋下污染隐患

违规操作是细胞污染的重要诱因，具体表现为多个方面。为节省时间，超净台使用超过四小时后，未进行 30 分钟紫外灭菌，仅用酒精擦拭就直接开始试验；器材或溶液久置未检测污染便直接使用，离心管多次复用、枪头交叉使用也会增加风险。超净台使用时不点酒精灯，或虽点了酒精灯却放在右上角，而操作者在左下角操作，无法有效利用酒精灯形成的无菌区。此外，徒手操作不带手套，会直接将手部细菌带入培养体系。

细胞培养间的仪器设备与物品管理不当同样不容忽视。枪式移液器、手术器械、离心机、冰箱等仪器，以及实验服、拖鞋等未定期消毒；物品被随意带出细胞房使用；移液管、一次性枪头、离心管、冻存管等实验用具，未按 121°C 高压灭菌 20 分钟后 37％烤干的要求灭菌就使用，这些都会为污染提供可乘之机。

二、环境杂乱滋生污染风险

超净台和细胞房桌面的杂乱是污染的温床。超净台并非储物箱，若堆积培养皿、各种规格的板子、枪头等物品，会形成诸多紫外线无法照射到的卫生死角，难以保证无菌环境。细胞房其他桌面也切忌物品堆积如山，酒精棉球、标签纸、牛皮纸等不宜大量堆放在细胞房，这些物品一旦不慎落入细胞培养板，会影响细胞生长，甚至导致细胞死亡。

三、培养箱清洁不及时引发污染

培养箱若长期不清洁，极易成为污染源头。当细胞出现污染时，不能仅丢弃污染的培养皿，需先检查培养箱内其他培养皿或孔板中的细胞是否污染。若多个板子出现类似污染块，很可能是培养箱的水或空气污染所致，此时必须对培养箱彻底清洁，进行酒精消毒和紫外照射。同时，要及时补充孵箱内的水，每十天半个月用酒精擦拭托盘，防止污染滋生。

四、人员管理混乱增加污染可能

细胞房对卫生要求极高，人员过多会导致不确定因素增加，难以保证操作在无菌条件下进行。人员出入试验室时，实验服当风衣穿、不扣纽扣、不戴鞋套，容易带入外界细菌造成污染。在超净台操作时，若多人交谈且不戴口罩，口腔中的细菌会趁机污染细胞。