在实验室细胞培养工作中，生物污染是常见问题，主要包括细菌污染、霉菌污染、支原体污染、黑点污染、真菌污染和原生动物污染这六种类型，每种污染都有其独特的表现；同时，细胞受到污染也存在特定原因，具体如下：

一、常见生物污染类型及特征

细菌污染

形态：在普通倒置显微镜下呈黑色和细砂状，形状会因感染菌种类不同而有差异。

培养液变化：一般会变得浑浊、呈黄色。

对细胞影响：对细胞生长有明显影响。

霉菌污染

形态：培养基中出现絮状杂质，显微镜下可见丝状和团块状漂浮物，菌丝明显。

培养液变化：无明显提及。

对细胞影响：初期细胞仍能生长，但长时间后生命状态会逐渐恶化。

支原体污染

特性：是隐蔽的污染物，不能通过过滤去除。

形态及培养液变化：显微镜下无可见污染迹象，如细胞病变、浊度或 pH 值变化，即使严重污染也不明显。

相关情况：在牛血清中是最常见的微生物之一，易让人产生错误的安全感。

黑点污染

形态：黑色的游动点，低倍镜下为黑色圆点，高倍镜下为可移动的黑色斑点，能穿透滤膜并在空气中扩散。

培养液变化：不浑浊，颜色和透明度无明显变化。

对细胞影响：影响较小，细胞仍可使用，生长良好，运动物体无明显增加，同一批血清培养的细胞中可能出现类似现象。

真菌污染

形态：显微镜下可见细丝，最初一些类似死细胞碎片，但很多清晰可见如珊瑚状，之后会慢慢长出细细的黑色细丝。

培养液变化：一般清澈，保持原色。

对细胞影响：生长较慢，不易被发现，一旦发现培养基污染，细胞很难存活。

原生动物污染

形态：显微镜下可见大量小点来回移动。

培养液变化：变得轻微浑浊。

对细胞影响：细胞仍能生长，但繁殖速度减慢，生长状态不好，边缘不清、不透明；与细胞形成共生关系，且竞争营养，数量较少时对细胞正常生长无影响，达到一定数量后会爆发恶性循环。

二、细胞受到污染的原因

取放细胞时引起的污染：细胞培养中取放细胞是基本操作，培养房开关门瞬间，环境中的微生物会进入培养箱，且内外温差导致内门产生冷凝水，极易吸附微生物，这些都是造成培养箱污染的风险因素。

灭菌不彻底造成的二次污染：细胞培养过程中，因培养基泼洒、水盘污染等操作问题，可能造成培养房大规模污染，此时对培养箱进行常规消毒（如紫外照射）只能达到表面消毒效果，尤其对真菌等顽固性污染无法彻底灭菌，进而导致后续培养过程中细胞污染频发。