实验原理

在含 FBS 的完全培养基中，将药物进行梯度稀释后与靶细胞共孵育，FBS 提供细胞存活所需营养，避免因营养缺乏导致的非特异性死亡；通过检测细胞增殖 / 存活情况，确定药物抑制细胞生长的最低浓度（IC₅₀），反映药物敏感性。

操作步骤

1. 细胞准备：用含 10% FBS 的 DMEM/RPMI-1640 培养基培养靶细胞（如肿瘤细胞系、细菌感染的宿主细胞），消化后调整浓度至 5×10⁴个 /mL。

2. 药物稀释：在 96 孔板中，用完全培养基将待检药物（如抗生素、化疗药）做 2 倍梯度稀释（0.1μg/mL 至 100μg/mL），每孔 50μL；设不含药物的完全培养基为阴性对照。

3. 细胞接种：每孔加入 50μL 细胞悬液，使终体积 100μL，细胞密度 2.5×10⁴个 / 孔，37℃、5% CO₂培养 48-72 小时。

4. 结果检测：加入 CCK-8 试剂（每孔 10μL），继续孵育 2 小时，酶标仪测 450nm 吸光度（OD 值），计算细胞存活率 =（药物组 OD / 阴性对照组 OD）×100%。

5. 结果判断：以细胞存活率降至 50% 时对应的药物浓度为 IC₅₀，IC₅₀越低，细胞对药物越敏感。

应用

• 肿瘤细胞系对化疗药、靶向药的敏感性筛查；

• 抗生素对感染细胞内病原体的抑制效果评价；

• 新药研发中候选药物的体外药敏活性初筛。