将可溶性抗原(如病毒蛋白、细菌毒素)吸附于兔红细胞表面(致敏红细胞),若待检样本中存在特异性抗体,可与致敏红细胞表面的抗原结合,引发红细胞凝集;通过该现象实现抗体的定性与定量检测。
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致敏红细胞制备:取 1% 兔红细胞悬液,加入适量纯化抗原(如乙肝表面抗原、禽流感病毒 HA 蛋白),37℃孵育 1 小时,期间每 15 分钟振荡 1 次;3000rpm 离心 5 分钟,弃上清,用生理盐水重悬为 1% 致敏红细胞悬液。
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样本稀释:待检血清用生理盐水做 2 倍梯度稀释(1:2 至 1:12800),每孔 50μL;设阳性血清、阴性血清及空白对照。
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凝集反应:每孔加入 50μL 致敏红细胞悬液,37℃孵育 30 分钟,观察凝集结果。
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结果判断:阴性 / 空白对照孔无凝集,待检孔出现凝集为阳性,记录最高阳性稀释度(抗体效价)。