实验原理

游离巯基（-SH）可与 Ellman 试剂（5,5'- 二硫代双 - 2 - 硝基苯甲酸）发生反应，生成黄色的 5 - 巯基 - 2 - 硝基苯甲酸，该产物在 412nm 处有特征吸收峰，吸光度值与游离巯基含量呈正相关，可通过比色法定量检测。

操作步骤

1. 肽段筛选：用 Full MS/ddMS2 方法鉴定人重组干扰素标准品酶解后的特异性肽段。

2. 标准曲线绘制：将酶解肽段稀释成系列浓度，掺入空白大鼠血浆酶解肽段中，上样后用 Target MS2 方法检测，根据峰面积绘制标准曲线。

3. 样本检测：取给药组大鼠血浆酶解肽段上样，依据标准曲线计算血浆中重组干扰素的浓度。

应用

用于生物药临床前药代动力学研究，监测注射入大鼠体内的重组蛋白药物浓度变化；

评估重组蛋白药物的体内代谢效率和稳定性。