实验原理

小鼠血清中含多种非特异性蛋白，可与组织切片上的非特异性结合位点结合，阻断一抗、二抗的非特异性吸附，降低免疫组化的背景噪音。

操作步骤

1、组织切片处理：石蜡切片脱蜡至水，抗原修复后，用 PBS 洗涤 3 次。

2、封闭：滴加 10% 小鼠血清（与二抗来源动物种属一致），室温孵育 30 分钟，不洗涤。

3、一抗孵育：滴加稀释的一抗（如抗 Ki67 抗体），4℃孵育过夜，PBS 洗 3 次。

4、二抗孵育与显色：滴加 HRP 标记的二抗，室温孵育 30 分钟；DAB 显色，苏木素复染，脱水封片后显微镜观察。

应用

• 1、优化免疫组化实验的染色效果，降低背景干扰；

  2、适用于小鼠组织样本的蛋白定位与表达水平检测。