实验原理

采用间接 ELISA 法，将布鲁氏菌抗原包被在酶标板上，羊血浆中的布鲁氏菌特异性抗体可与抗原结合；加入 HRP 标记的抗羊 IgG 二抗，通过底物显色反应，实现抗体的定性与定量检测。

操作步骤

1. 抗原包被：布鲁氏菌裂解抗原用碳酸盐缓冲液（pH9.6）稀释至 2μg/mL，每孔 100μL 包被酶标板，4℃过夜；PBST 洗板 3 次。

2. 封闭与孵育：5% 脱脂奶粉 37℃封闭 1 小时；加入 1:100 稀释的羊血浆，37℃孵育 1.5 小时，洗板 5 次。

3. 二抗与显色：加入 HRP - 抗羊 IgG 二抗（1:5000 稀释），37℃孵育 1 小时；TMB 底物显色 10 分钟，H₂SO₄终止反应，测 450nm 吸光度值。

3. 结果判断：OD 值≥阴性对照 2.1 倍为阳性，提示羊感染布鲁氏菌。

应用

• 1. 绵羊布鲁氏菌病的血清学诊断与流行病学调查；

• 2. 评估布鲁氏菌疫苗免疫绵羊后的抗体水平，验证疫苗保护效果。