在细胞培养中，牛血清虽发挥着关键作用，但偶尔会出现培养基内漂浮 “小黑点” 的问题。遇到这一情况不必惊慌，需通过科学观察和分析明确成因，再采取针对性措施解决。

一、小黑点的初步判断方法

发现培养基中的小黑点后，需通过两步观察初步排查成因：

1、肉眼观察：查看培养基是否出现混浊现象。

2、镜下观察：重点关注细胞生长状态是否正常，以及黑点是否存在游动特征。

1）若培养基迅速变黄、变混浊，且黑点伴随游动，可能是微生物污染（如细菌、支原体污染），此时微生物会大量繁殖并影响细胞存活。

2）若细胞生长状态良好，与黑点出现前无明显差异，则黑点多由非污染因素导致。

二、非污染性小黑点的具体成因

当细胞生长未受影响时，小黑点的形成可能与以下因素相关：

1、细胞生长过老：细胞培养时间过长、密度过高时，会出现衰老死亡，破碎的细胞残骸会形成小黑点。

2、血清质量问题：血清质量不佳或反复冻融，会导致血清中的成分沉淀或变性，形成小黑点。

3、培养基 pH 值异常：配制培养基时 pH 值偏高，超出细胞适宜生长范围（通常为 7.0-7.2），可能引发成分析出形成黑点。

4、配制环境问题：

1）水质不合格（如含杂质或污染物）；

2）容器未彻底清洁或消毒，残留杂质进入培养基。此类黑点可通过离心、过滤方法去除。

5.原代细胞特有问题：原代细胞培养中可能出现小黑点，多为原代组织残留的杂质，通过多次传代可逐渐消除。

三、小黑点的预防措施

为减少小黑点的出现，可采取以下防控手段：

1、优化血清保存：尽可能减少血清的冻融次数，避免反复冻融导致成分变性沉淀。

2、调整培养基处理：培养基无需进行 37℃水浴预热，减少温度变化对成分稳定性的影响。

3、严格控制 pH 值：确保培养基的 pH 值维持在最佳范围（7.0-7.2），避免因 pH 异常引发沉淀。

4、规范配制流程：严格把控配制培养基的水质（建议使用超纯水），培养容器需定期彻底刷洗和消毒。

5、合理安排细胞传代：掌握细胞传代的最佳时机，避免细胞生长过老、密度过高，减少细胞残骸的产生。