将可溶性抗原(如鸡新城疫病毒抗原、寄生虫抗原)吸附于鸡红细胞表面(致敏红细胞),若待检样本(如鸡血清)中存在特异性抗体,抗体可与致敏红细胞表面的抗原结合,使红细胞发生肉眼可见的凝集;通过凝集现象判断抗体是否存在及效价。
-
致敏红细胞制备:取 1% 鸡红细胞悬液,加入等量纯化抗原(如新城疫病毒 NP 蛋白),37℃孵育 1 小时,期间每 15 分钟振荡 1 次;3000rpm 离心 5 分钟,弃上清,用生理盐水重悬为 1% 致敏红细胞悬液。
-
样本稀释:在 96 孔板中,用生理盐水将待检鸡血清做 2 倍梯度稀释(1:2 至 1:1024),每孔 50μL;设阳性血清对照、阴性血清对照及生理盐水空白对照。
-
凝集反应:每孔加入 50μL 致敏红细胞悬液,轻轻混匀,37℃孵育 30 分钟,观察结果。
-
结果判断:空白 / 阴性对照孔红细胞呈点状沉淀,待检孔出现均匀凝集块为阳性,记录能引起凝集的血清最高稀释度(抗体效价)。