实验原理

利用低渗裂解结合离心法去除鸡红细胞内容物（如血红蛋白），获得纯化的红细胞膜；通过 SDS - 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），根据膜蛋白分子量的差异将其分离，再通过染色观察蛋白条带，分析膜蛋白组成。

操作步骤

1. 红细胞膜提取：取 5mL 2% 鸡红细胞悬液，3000rpm 离心 5 分钟，弃上清；加入 10mL 低渗裂解液（5mmol/L Tris-HCl，pH7.4），冰浴 30 分钟，期间轻轻振荡；12000rpm 离心 20 分钟，弃上清（含血红蛋白）；用裂解液洗涤沉淀 3 次，获得红细胞膜。

2. 蛋白变性：将膜沉淀加入蛋白上样缓冲液（含 SDS、β- 巯基乙醇），沸水浴 5 分钟，使膜蛋白变性。

3. SDS-PAGE 电泳：将变性后的样品加入聚丙烯酰胺凝胶的加样孔，进行电泳（浓缩胶电压 80V，分离胶电压 120V）；电泳结束后，用考马斯亮蓝 R-250 染色 2 小时，脱色液（甲醇：乙酸：水 = 4:1:5）脱色至条带清晰。

应用

• 分析鸡红细胞膜蛋白的组成（如血型抗原蛋白、受体蛋白）；

• 研究药物、应激对膜蛋白表达或降解的影响（如膜蛋白条带强度变化）。