实验原理

马血清中含多种蛋白质（主要为 IgG），将其作为抗原免疫实验动物（如兔），可刺激动物免疫系统产生特异性抗马 IgG 抗体；马血清的免疫原性适中，能诱导机体产生高滴度抗体，为后续实验提供特异性探针。

操作步骤

1、免疫原制备：取新鲜马血清，用生理盐水稀释至 50% 浓度，与等量弗氏完全佐剂充分乳化（油包水状态，滴入水中不扩散）。

2、初次免疫：家兔背部皮下多点注射乳化抗原，每点 0.2mL，总量 1mL；同时设空白对照组（注射生理盐水 + 佐剂）。

3、加强免疫：初次免疫后 2 周，用弗氏不完全佐剂乳化的 50% 马血清进行第 1 次加强免疫（剂量同初次）；1 周后再用无佐剂的 50% 马血清进行第 2 次加强免疫（耳缘静脉注射 0.5mL）。

4、抗体检测与收集：末次免疫后 7 天，耳缘静脉取少量血清，用双向免疫扩散或 ELISA 检测抗体效价（≥1:128 为合格）；效价达标后心脏采血，37℃静置 1 小时，4℃过夜，3000rpm 离心 10 分钟分离血清，-20℃保存。

应用

• 制备兔抗马 IgG 抗体，用于马血清相关抗原的检测（如免疫组化、Western blot 的二抗）；

• 作为血清学实验的阳性对照抗体，支撑动物疫病诊断试剂研发。