实验原理

马血清中含完整的补体系统，激活后可介导致敏绵羊红细胞溶血；通过测定能使 50% 致敏红细胞溶血的马血清稀释度，反映补体总活性（CH50 值），评估马血清补体功能状态。

操作步骤

1、致敏红细胞制备：绵羊红细胞用生理盐水洗涤 3 次，配制成 2% 悬液，加入等量抗绵羊红细胞抗体（溶血素），37℃孵育 20 分钟，备用。

2、血清稀释：马血清用巴比妥缓冲液做 2 倍梯度稀释（1:2 至 1:128），每管 500μL；设空白对照（仅缓冲液）和溶血对照（致敏红细胞 + 缓冲液）。

3、溶血反应：每管加入 500μL 致敏红细胞悬液，37℃孵育 30 分钟，3000rpm 离心 5 分钟，取上清液。

4、结果计算：测上清液 413nm 吸光度（OD 值），计算溶血率 =（样品 OD - 空白 OD）/（溶血对照 OD - 空白 OD）×100%；以溶血率 50% 对应的血清稀释度为 CH50 值，反映补体活性。

应用

1、研究马血清补体系统的功能特性，或疾病、应激对补体活性的影响；

2、筛选补体抑制剂（如中药成分、小分子化合物），支撑免疫调节药物研发。