实验原理

马血清中可能含过敏原蛋白（如白蛋白、免疫球蛋白片段），以马血清为抗原包被 ELISA 板，检测待检血清（如疑似马血清过敏患者血清）中特异性 IgE 抗体；通过抗体结合信号判断是否存在过敏倾向。

操作步骤

1. 包被：马血清用包被缓冲液稀释至 5μg/mL，每孔 100μL 加入 96 孔板，4℃孵育过夜，洗板 3 次。

2. 封闭：每孔加入 200μL 1% BSA，37℃孵育 1 小时，洗板 3 次。

3. 加样：待检血清用稀释液做 1:50 稀释，每孔 100μL，37℃孵育 2 小时；设阳性对照（已知马血清过敏患者血清）、阴性对照（健康人血清），洗板 3 次。

4. 显色与判断：加入 HRP 标记的抗人 IgE 二抗（1:10000 稀释），37℃孵育 1 小时，洗板 5 次；TMB 显色后终止反应，OD 值≥阴性对照 OD 值 ×2.1 为阳性（存在特异性 IgE 抗体）。

应用

• 临床马血清过敏的辅助诊断（如马血清制品注射前的过敏筛查）；

• 马血清过敏原蛋白的鉴定与纯化研究。